زیرهمسانه‌سازی و بررسی بیان ژن صناعی ناحیه اتصالی نوروتوکسین بوتولینوم تیپ B (BD/B

نویسندگان

  • ابراهیمی, فیروز مرکز تحقیقات زیست‌شناسی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه جامع امام حسین‌(ع)، تهران، ایران
  • برادران, مجید مرکز تحقیقات زیست‌شناسی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه جامع امام حسین‌(ع)، تهران، ایران
  • تاروردی‌زاده, یوسف مرکز تحقیقات زیست‌شناسی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه جامع امام حسین‌(ع)، تهران، ایران
  • حاجی‌زاده, عباس مرکز تحقیقات زیست‌شناسی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه جامع امام حسین‌(ع)، تهران، ایران
  • نظریان, شهرام مرکز تحقیقات زیست‌شناسی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه جامع امام حسین‌(ع)، تهران، ایران
چکیده مقاله:

زمینه و هدف: سندرم بوتولیسم توسط نوروتوکسین باکتری کلستریدیوم بوتولینوم ایجاد می‌شود. این نوروتوکسین دارای 7 سروتیپ از A-G می‌باشد. بهترین راه برای جلوگیری از سندرم بوتولیسم ایجادشده توسط BoNT/B، استفاده از واکسن‌های نوترکیب ساخته‌شده از ناحیه اتصالی آن (به‌علت داشتن اپی‌توپ‌های کافی برای تحریک سیستم ایمنی) است. در این پژوهش بیان زیرواحد اتصالی نوروتوکسین بوتولینوم تیپ B، به‌منظور کاندید واکسن مورد بررسی قرار گرفت. روش بررسی: ابتدا توالی ژن ناحیه اتصالی نوروتوکسین بوتولینوم تیپ  Bاز سایت NCBI با کد دسترسی EF028399.1 گرفته شد. بعد از بهینه‌سازی کدون، ژن مورد نظر به‌صورت صناعی در داخل وکتور pUC18 تهیه گردید. سپس این ژن در وکتور بیانی pET32a(+) که دارای مارکر انتخابی آمپی‌سیلین می‌باشد، زیرهمسانه‌سازی شد. جهت تأیید صحت زیرهمسانه‌سازی؛ از PCR، برش آنزیمی و تعیین توالی و برای بررسی بیان از سوش E. coli BL21(DE3) استفاده گردید. صحت بیان پروتئین با الکتروفورز (تحت شرایط مختلف و روش وسترن بلات) مورد بررسی قرار گرفت. یافته‌ها: واکنش‌های PCR، برش آنزیمی را براساس سایت‌های برشی در وکتور و در نهایت، تعیین توالی تأیید کرد که ژن مورد نظر به‌طور مناسب در وکتور pET32a(+)، همسانه‌سازی شد. بررسی بیان با استفاده از SDS- PAGE و متعاقب آن انجام وسترن بلاتینگ نشان داد پروتئین مورد نظر در سویه بیانی مذکور بیان نمی‌شود. نتیجه‌گیری: اگرچه ژن مورد نظر در داخل وکتورpET32a(+)، به‌طور مناسب زیرهمسانه‌سازی گردید، با این حال هیچ بیان قابل‌مشاهده‌ای از ژن مورد نظر دیده نشد.

برای دانلود باید عضویت طلایی داشته باشید

برای دانلود متن کامل این مقاله و بیش از 32 میلیون مقاله دیگر ابتدا ثبت نام کنید

اگر عضو سایت هستید لطفا وارد حساب کاربری خود شوید

منابع مشابه

زیرهمسانه‌سازی و بررسی بیان ژن صناعی ناحیه اتصالی نوروتوکسین بوتولینوم تیپ A (BD/A)

زمینه و هدف: سندرم بوتولیسم توسط نوروتوکسین باکتری کلستریدیوم بوتولینوم ایجاد می‌شود. این نوروتوکسین دارای 7 سروتیپ از A-G می‌باشد. بهترین روش برای پیشگیری از سندرم حاصل از نوروتوکسین بوتولینوم (BoNT)، استفاده از واکسن‌های نوترکیب ساخته‌شده از ناحیه اتصالی آن (به‌علت داشتن اپی‌توپ‌های کافی برای تحریک سیستم ایمنی) می‌باشد. در این مطالعه ناحیه اتصالی نوروتوکسین بوتولینوم تیپ A (BoNT/A) بررسی گردی...

متن کامل

زیرهمسانه سازی و بررسی بیان ژن صناعی ناحیه اتصالی نوروتوکسین بوتولینوم تیپ b (bd/b

زمینه و هدف: سندرم بوتولیسم توسط نوروتوکسین باکتری کلستریدیوم بوتولینوم ایجاد می شود. این نوروتوکسین دارای 7 سروتیپ از a-g می باشد. بهترین راه برای جلوگیری از سندرم بوتولیسم ایجادشده توسط bont/b، استفاده از واکسن های نوترکیب ساخته شده از ناحیه اتصالی آن (به علت داشتن اپی توپ های کافی برای تحریک سیستم ایمنی) است. در این پژوهش بیان زیرواحد اتصالی نوروتوکسین بوتولینوم تیپ b، به منظور کاندید واکسن ...

متن کامل

زیرهمسانه سازی و بررسی بیان ژن صناعی ناحیه اتصالی نوروتوکسین بوتولینوم تیپ a (bd/a)

زمینه و هدف: سندرم بوتولیسم توسط نوروتوکسین باکتری کلستریدیوم بوتولینوم ایجاد می شود. این نوروتوکسین دارای 7 سروتیپ از a-g می باشد. بهترین روش برای پیشگیری از سندرم حاصل از نوروتوکسین بوتولینوم (bont)، استفاده از واکسن های نوترکیب ساخته شده از ناحیه اتصالی آن (به علت داشتن اپی توپ های کافی برای تحریک سیستم ایمنی) می باشد. در این مطالعه ناحیه اتصالی نوروتوکسین بوتولینوم تیپ a (bont/a) بررسی گردی...

متن کامل

همسانه‌سازی و بیان ناحیه اتصالی نوروتوکسین نوع B باکتری کلستریدیوم بوتولینوم در باکتری E. coli

   Backgrounds & Aims: Botulism is caused by botulinum toxin. The best way to avoid the neurotoxin syndrome caused by BONT/B is to use recombinant vaccine made of BONT/B binding domain because binding domain has sufficient epitops to stimulate immune response. Materials & Methods: Initially BONT/B binding domain gene sequence were obtained from GenBank. Then the primers were designed. PCR react...

متن کامل

همسانه سازی و بیان ناحیه اتصالی نوروتوکسین نوع b باکتری کلستریدیوم بوتولینوم در باکتری e. coli

پیش زمینه و هدف: سندرم بوتولیسم توسط نوروتوکسین های باکتری کلستریدیوم بوتولینوم ایجاد می شود. این نوروتوکسین ها دارای هفت سروتیپ از a – g می باشند. بهترین راه برای جلوگیری از سندرم بوتولیسم ایجاد شده توسط bont/b استفاده از واکسن های نوترکیب ساخته شده ی ناحیه اتصالی آن می باشد. چون دارای اپی توپ های کافی برای تحریک سیستم ایمنی می باشد.مواد و روش ها: ابتدا سکانس ژن ناحیه اتصالی را از سایت ncbi گر...

متن کامل

همسانه سازی و بیان ناحیه کاتالیتیک نوروتوکسین بوتولینوم تیپ E در باکتری E.coli

Background and purpose: Clostridium botulinum bacteria produces seven types of botulinum neurotoxins among which types A, B, E and F are responsible for human botulism. One of the treatments for botulism is the inhibition of botulinum neurotoxins catalytic domain activity by inhibitors. In this study, botulinum neurotoxin type E catalytic domain has been cloned in pET28a vector and expressed in...

متن کامل

منابع من

با ذخیره ی این منبع در منابع من، دسترسی به آن را برای استفاده های بعدی آسان تر کنید

ذخیره در منابع من قبلا به منابع من ذحیره شده

{@ msg_add @}


عنوان ژورنال

دوره 10  شماره 5

صفحات  29- 37

تاریخ انتشار 2016-07

با دنبال کردن یک ژورنال هنگامی که شماره جدید این ژورنال منتشر می شود به شما از طریق ایمیل اطلاع داده می شود.

کلمات کلیدی

کلمات کلیدی برای این مقاله ارائه نشده است

میزبانی شده توسط پلتفرم ابری doprax.com

copyright © 2015-2023